實(shí)驗干貨！影響ELISA實(shí)驗結(jié)果的三方面因素

 ELISA法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的特點(diǎn)，并具有操作簡便、無放射性危害的優(yōu)點(diǎn)，但在測定中常會出現(xiàn)一些誤差和問題。我們通過幾年的實(shí)驗觀察，認(rèn)為影響結(jié)果的因素有如下方面。
1、 試驗儀器
（1）加樣器是否經(jīng)過校正，酶免測定血清用血量很少，如手工加樣器的性能不好，吸取樣品不精確，會使結(jié)果忽高忽低。
（2）每次洗板前，應(yīng)檢查洗板機(jī)針孔有無堵塞。

2、試劑盒
（1）抗原、抗體活性對效價的影響：主要是試劑中抗體（或抗原）的效價降低或失活，結(jié)果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高，對雜質(zhì)的反應(yīng)靈敏度也高，實(shí)驗中空白對照OD值偏高或假陽性。

（2）酶結(jié)合物濃度過高，也會導(dǎo)致OD值假性增高。

3、 操作
（1）檢測前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用，試劑用完及時放回冰箱冷藏，以免造成試驗結(jié)果假性降低。
（2）加樣時注意勿觸及包被板底部，以免擦傷包被物使抗體（抗原）脫落而影響實(shí)驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
（3）洗滌不充分，會使結(jié)果假性增高，過分洗滌呈假陰性。
（4）比色時應(yīng)保持包被孔底部無異物、無水汽，特別是冬季板從37℃水浴箱取出時，底部留有水汽，應(yīng)將板底擦干后進(jìn)行比色，水汽或孔內(nèi)氣泡也會使OD值升高。
（5）抗原與抗體反應(yīng)達(dá)到完全平衡，依賴于溫度與時間。溫度高于45℃易引起失活及標(biāo)記物脫落，溫度低于4℃，影響反應(yīng)速度。總之，由于ELISA實(shí)驗的影響因素較多，在實(shí)際工作中必須操作規(guī)范、仔細(xì)，避免和排除各種因素的影響，使之得到準(zhǔn)確可靠的檢驗結(jié)果。